手把手教你将WB蛋白条带拉直、定量，用于SCI投稿！

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小编从2019年到2022年12月29日，一共发了19篇SCI（含共一）。做过Western blot的同学就知道下图的流程，看完此文，你将学会整个WB图片处理、做如下A、B两个图：

我们要跑WB，然后将膜放到机器上用Image Lab软件进行曝光，将不同曝光时间产生的SCN图片文件保存到电脑上。

但是我们经常会把这些不同曝光时间的SCN图片文件copy到自己的电脑上，然后再选择一张美观一点的SCN图片文件转换为图片，用于投稿。

所以，上述整个流程我们一共需要3款WB必备软件：

第一，我们自己的电脑需要安装一个“Image Lab软件”。才能将美观的SCN图片文件转换为Tiff图片，用于作图。

第二，我们自己电脑还需要安装一个WB条带定量拉直软件，这个软件是科研必备软件，它可以对条带进行定量和拉直，

第三，我们需要一个WB量化之后做柱形图的GraphPad软件。

所以说，做好WB，我们一定需要这三款软件。这3款WB神器免费分享给大家（原价1899元）：

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那怎么用这3款软件完成WB作图呢？小编来教大家：

一、WB曝光时SCN图片文件转换为Tiff图片：

如下方式直接用Image Lab(此次资源里面包括了Win和Mac的安装包)打开一张背景低、条带平的SCN图片文件，并保存（左上角按钮）为tiff图片，这样就ok了。

二、WB蛋白条带定量、拉直：

1、WB条带定量。接上，Image Lab导出图片之后，四个泳道，我感觉内参不平（所以我需要量化它，并调整内参）：

那我们将这张图片拖到WB条带定量拉直软件（此次资源包里面包括了Win+Mac的安装包）中，打开这张图：

a. 把图片转化成灰度图片：Image>Type 选16-bit：

b. 消除背景影响：Process>Subtract Background. 选择50基本可以。

c. 框中条带：如下选择你需要定量的条带：

d. 选择条带，如下操作后点击YES:

e. 可视化条带：

后跳出可视化页面：

f.框出想要量化的孔：如下操作，按住电脑的shift键，然后用鼠标划线：

g.定量：选择量化棒，用鼠标点击每一个框：

随后会跳出量化的结果：

导出为Excel即可。同时，这个值除以原始上样量就是浓度了，随后我们再用一个统一的值除以浓度，就是调整后的每一个孔道的上样量了：

此外，定量之后，我们还可以用量化图做目的蛋白的柱形图，如下计算好目的蛋白的值和内参的值，目的蛋白除以内参就是量化值：

我们可以看到实验组的WNT4蛋白量明显高于对照组。

2.拉直。

还是一样，我们用WB定量拉直软件打开弯曲的WB图片：

随后沿着弯曲的线划线：

再用鼠标双击Segmented line选项，设置线段的宽度至包含所有条带：

点击菜单栏Edit-Selection-Straighten，倾斜的WB条带立刻被拉直，并保存为新的图片：

三、WB量化柱形图：

给大家分享的Graphpad安装包是Win版的，自带激活的，是我们机构批量授权的，永久免费使用的。那我们接着上述做图，我们打开Graphpad，如下：

将我们的值复制进去：

如下点击出图：

再双击修改颜色就行：

最后如下点击非配对T检验进行差异分析：

结果是四颗星：

再把scale bar加上：

最后导出投稿就行：

好了以上就是做WB的3款必备软件，科研必备！

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